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还有比较常见的问题是引物二聚体引起的双重峰 溶解曲线(melt curve):表示随温度升高 DNA 的双螺旋结构降解程度的曲线。总的 DNA 双螺旋结构降解一半的温度称为熔解温度(**),不同序列的 DNA,** 值不同。DNA 中 G-C 含量越高,** 值越高,成正比关系。正如上面提到的,正常的样品孔溶解曲线应该是单峰的,如下图。如果出现了双峰,则要考虑是否引物设计不合理或者引物过量引起溶解曲线出现多峰的情况。 一般Ct值17-35正常,20-30最佳 RT-qPCR的CT值超过30就算是低表达或者无表达了,是不准确的,所以会跳动的比较厉害。 建议你做一下cDNA稀释比例的测试,选择正确的cDNA浓度使CT值在18~30之间。 Ct值(阈值循环) C代表Cycle,t代表threshold(阈值,临界值),Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。 研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代Ct值。因此,只要获得未
N3级 阅读 2019-04-30 09:07 来自京东iPhone客户端
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